如何选择固相萃取柱?
选择固相萃取柱的关键除了要求的规格之外,决定分离性能的是它的填料。在选择萃取柱时,必须根据待检测样品的种类及其物化性质选择合适的填料。固相萃取填料通常是色谱吸附剂,大致可以分为三大类,分别是以硅胶、高聚物、无机材料为基质。但SOURCE 产品的粒径只有30微米,不能满足Protein A 介质对粒径一般要大于40微米的要求。纳微经过多年的努力开发出世l界领l先的微球制备技术,突破大单分散大粒径多孔微球的制备难题,成为家生产单分散Protein A 亲和层析介质的公司。
层析填料装置
锥形封头一种负压层析装置,它包括:柱体上端设有快开式紧锁锁紧的上锥形封头和上锥形卡套相互卡接,上锥形封头上部设有负压接口经负压阀、汽液分离器与负压泵相连,柱体下端设有快开式紧锁锁紧的下锥形封头和下锥形卡套相互卡接,下锥形封头下部设有进液接口经进液管道与三通阀体上部的出液接口相连,三通阀体下部分别设有两个与进液管道相连的进液接口。
层析填料交换分离
离子交换层析根据化合物的净电荷进行分离。带负电荷或正电荷的官能团共价结合于固相载体基质,分别成为阳离子交换剂和阴离子交换剂。当一个带电荷的分子加入到带有相反电荷的交换剂时,它就会被吸附,同时,带相同电荷的离子和中性分子则被洗脱到层析柱的外水体积里。带电荷分子的结合是可逆的,通常可用盐或PH梯度洗脱吸附的分子。 离子交换层析可以有多种应用,包括分离和纯化生物分子,分离无机离子,试剂和水的去离子化,盐转换以及去除金属离子、化乙锭和SDS。 化合物的分离策略。如果分子在PH高于其等电点时稳定,可使用阴离子交换树脂。如果分子在PH低于其等电点时稳定,则使用阳离子交换树脂。
层析填料寿命衰减的影响因素
样品状态
a.样品澄清度:样品越澄清对填料的寿命衰减影响越小。
b.样品粘度:样品的粘度越小,对填料寿命的影响越小。
c.样品酸碱度:过酸过碱都会加速填料寿命的衰减。
d.样品离子强度:离子强度越高填料寿命衰减的越快。
e.样品成分组成:样品成分越复杂,层析过程越复杂,填料的寿命衰减越快(这也与填料所处的工艺阶段吻合,捕获粗纯阶段填料寿命衰减的更快,精纯阶段填料寿命衰减的慢。)
层析工艺
a.柱床高度,流速及反压越大,工艺过程填料受到的外力就会增大,填料的寿命衰减就会增大。
b.层析工艺过程的缓冲液的种类及洗脱的CV数也会影响填料的寿命,缓冲液越温和对填料寿命衰减影响越小,洗脱CV数越小对填料寿命衰减影响越小。